Etude d'une greffe osseuse traitée couverte par la propolis chez les petits animaux

Abstract

: Les allogreffes osseuses ont des propriétés d’incorporation plus faibles, ce type de greffe nécessitant une stérilisation afin de réduire la charge antigénique et le risque de transmission des maladies, cette préparation à un effet néfaste sur le processus de l'ostéointégration et fragilise l'os d'ou le recours à des substances osteoinductrices qui sont chères d'une part et d'autres part sont toujours en cours de recherches pour certains produits. Sachant que la propolis du commerce à montré son effet sur la formation osseuse, notre étude est venue pour donner une autre alternative dans le domaine des allogreffes diaphysaires en se penchant vers la médecine alternative. L'étude in vitro consiste au dosage des polyphénoles et des flavonoïdes totaux , ainsi que deux autres paramètres (le pH et le rendement ) pour les dix échantillons . L'expérimentation in vivo consiste à l'utilisation des greffons allogéniques implantés dans des fémurs de lapins afin de démontrer son pouvoir sur l'ostéointégration . Cette expérimentation a été effectuée sur cinquante (50) lapins de race néozélandais (mâles) adultes d'âge compris entre 6 mois et 1 an, d'un poids corporel moyen estimé à 3 kg, dont 20 ont servi de donneurs. Les lapins receveurs au nombre de trente ont été répartis en deux groupes de quinze, chaque groupe est divisé en cinq lots de trois lapins, le premier représente le groupe témoin et dont les animaux ont reçu une greffe allogénique corticale cylindrique autoclavée orthotopique, immobilisée par un enclouage centromédullaire simple de type kushner renforcé par une suture métallique. Le deuxième groupe a subi le même procédé chirurgical sauf que l'allogreffe autoclavée sera couverte d'une fine couche d'extrait de propolis algérienne en per opératoire (EEPA10). Le but de ce travail est de choisir une propolis algérienne riche en substance active collectée de différentes région du territoire national en montrant certaines vertus thérapeutique sur les greffons allogéniques par un suivi clinique et para-clinique. Les résultats in vitro ont montré que la propolis Algérienne de la région du sud et celle de l'ouest sont les plus riches: 99,98 mg Gallic Acid /g propolis de polyphénoles totaux et de 54,4 mg Quercetin g propolis de flavonoïdes totaux pour la wilaya de Laghouat (P10), et de 71,6 et 76,1 mg Gallic Acid /g propolis de polyphénoles totaux et de 38,7 et 42,9 mg Quercetin/g propolis de flavonoïdes totaux respectivement pour les échantillons de Ouled boughadou (P8) et bouchakif (P6) wilaya de Tiaret, Algérie. Le rendement de la propolis algérienne des quatre régions après l'extraction éthanolique a révélé une valeur maximale pour la propolis de la région du sud qui est de l'ordre de 35,59 ± 5,26 % et un rendement minimal pour la région de l'est qui est de l'ordre de 18,28 ± 2,62 %. Le pH trouvé était de 4,47 ± 0,26 ce qui signifie que toutes les propolis sont de nature acide. Les valeurs maximales qui ont été enregistrées dans l'est sont de l'ordre de 4,56 ± 0,32, les valeurs minimales dans le centre sont de l'ordre de 4,4± 0,14. In vivo nous avons constaté lors du suivi radiologique que la vitesse du passage du cal au niveau des interfaces était de l'ordre de 5,33 Sem ± 2,33 pour l'interface proximale et 6.66 Sem ± 4.61 pour l'interface distale; une excellente osteoconduction et osteoinduction au niveau des deux interfaces avec un éclatement du greffon constaté pour le lot ASP. Le suivi hémato-biochimique laisse voir que l'hémoglobine pour les lots ASP et AAP en pré et post opératoire étaient très significative, une baisse très significative (p ˂ 0,01) des leucocytes pour le lot AAP, des variations des taux de thrombocytes hautement significatives pour le lot AAP (p ˂ 0,001), une activité enzymatique de la phosphatase alcaline très significative (p ˂ 0,001) pour le lot AAP en pré et post opératoire. Le dosage du calcium en per et post opératoire pour les deux lots avec et sans propolis était non significatif, alors qu'une variation très significative (p ˂ 0,001) pour le taux de phosphore pour le lot ASP en post opératoire. Le résultat histologique révèle un score de 2 à ( 3 et 7 j) et de 3 à (10 et 12 j) et de 4 à j+12 j pour le lot ASP ,pour le lot AAP un score de 2 à (3j) 2,5 à (7j) ,3 à (10j) et 4 à (12 et +12j ). Le suivi clinique à révélé l’obtention d’un appui complet et permanent pour les AAP dés le début de la première semaine alors que pour les ASP il n'a été observé qu'après la septième semaine. Pour les animaux dont nous avons utilisé les greffons couverts de l'EEPA10 l’évolution clinique a été caractérisée par l’apparition d’un gonflement au niveau de la plaie (fémur gauche) dès le 10 éme jour du suivi, l'étendu du gonflement a été estimé à 1Cm2, Pour le groupe AAP. La température moyenne notée était de 38,28ᵒC ± 0,28, la maximale étant de 38,7 ᵒC et la minimale était de 37,3 ᵒC. Pour le groupe ASP une température moyenne de 39,54 ᵒC ± 0,26 a été enregistrée, la maximale étant de 41,3 ᵒC et la minimale était de 39 ᵒC. Aucune sortie de la broche n'a été observée soit pour les animaux avec une allogreffe non couverte de propolis ou pour les animaux dont les greffons allogéniques ont été couvert d'une fine couche d'EEPA10. Aucun comportement turbulent ou agressif n'a été observé soit pour les animaux ASP ou pour les animaux à AAP. Notre étude a montré que la propolis algérienne la plus riche en flavonoïdes et polyphénoles est celle de la région du sud (Laghouat) et la région de l'ouest (Tiaret) et que le pH de propolis algérienne est de nature acide, et que le rendement de la propolis algérienne varie de 18,28 à 35,59 %. La propolis semble avoir un effet anti- inflammatoire, analgésique et même un effet anesthésique locale en postopératoire. Nos résultats hémato-biochimiques montrent que l'EEPA10 (Laghouat) à un effet immunostimulant et que la perte de sang en pré opératoire engendre une diminution du taux d'hémoglobine en post opératoire, par ailleurs cette résine contient des substances anti agrégation plaquettaires. La forte synthèse de la phosphate alcaline pour les lots AAP démontrant l'effet d'EEPA10 sur l'osteoinduction (formation des ostéoblastes) et on a pu déduire aussi que la propolis de Laghouat a pu couvrir la carence du phosphore vu les valeurs non significatives du phosphore en post opératoire. Le suivi radiologique nous a permis de mieux comprendre l'action de l'EEPA10 sur l'ostéo-induction et l'ostéo-conduction par rapport à la rapidité de la vitesse du cal au niveau des deux interfaces et à la direction de son avancement au coté du greffon. La radiographie nous a laissé la chance de déduire que le produit utilisé dans notre expérimentation semble avoir corrigé la fragilité causée par l'autoclavage et a rendu le greffon allogénique capable d'induire une osteoinduction et osteoconduction parfaite en ouvrant des perspectives pour la réévaluation des procèdes d'autoclavage comme technique de stérilisation . La propolis algérienne P10 semble être capable de stimuler la formation d'un cartilage minéralisé à sept jours et une formation osseuse à 12 jours. Les clichés numériques de radiologie pendant trois mois nous ont aidés à mieux juger que l'enclouage centromédullaire simple renforcé par une suture métallique a assuré une excellente immobilisation des greffons diaphysaires chez l'espèce lapine .